兔源單株抗體(Rabbit mAb)為什麼這麼厲害?

ABclonal 專利抗體開發平台SMab™大公開

撰文新聞中心
日期2022-11-21
兔源單株抗體擁有高多樣性、高親和力、高特異性及對半抗原辨識能力佳等眾多優勢。

抗體是生命科學研究與臨床檢測產品最常使用的工具與原料之一,常常用來檢測蛋白在細胞或是組織中的表現量,如西方墨點法、ELISA、免疫螢光染色等都是會使用到抗體的實驗應用,用於研究各類疾病、癌症的訊號傳遞和致病機轉。抗體可分為多株抗體及單株抗體,和多抗相比,單抗具有高度的專一性,而不同物種的抗體其效能也有所不同,通過對這些不同物種來源的單株抗體進行比較研究發現,兔單株抗體具有高特異性、高親和力、多特異性等優勢,在生物醫學領域得到了廣泛的應用。
 
兔源單株抗體的特性與優勢
 
1.高多樣性:
在B細胞的成熟過程中,調控抗體表現的V-D-J基因會進行重組(Rearrangement)、轉換(Conversion)和高頻突變(Somatic Hypermutation)等方式變換基因序列,並通過這些變化來形成B細胞庫。在人和小鼠中,B細胞成熟後,V-D-J基因的轉換或重組就會停止, B細胞只能通過高頻突變來增加抗體的親和力及多樣性,而兔子的B細胞在出生後,還能夠在腸道相關淋巴組織(gut-associated lymphoid tissues,GALT)以及其他次級淋巴組織中(如脾臟、淋巴結等)繼續發育,在接受抗原刺激的情況下繼續發生V-D-J的重組和轉換等現象,造就兔子抗體庫的多樣性
 
2.高親和力:
如上所述,兔子成熟後的B細胞仍可透過基因轉換和高頻突變來增加抗體親和力。抗體的親和力通常用平衡解離常數(KD)來判斷親和力強度,KD越小說明解離越少,代表抗原抗體之間親和力越強。平均兔單抗親和力約在10-10~10-11 M之間(比鼠單抗高100倍左右),部分的兔多抗甚至可達到10-12 級別,顯示兔單抗的親和力相當高。
 
3.高特異性:
另外,兔子的免疫系統對於一些抗原表位的細微差異更加敏感。這不僅使兔子更加容易產生針對轉譯後修飾位點的抗體(如磷酸化修飾、甲基化修飾等),因此,兔單抗在臨床上已經被認定是抗體藥物的標準,廣泛應用於腫瘤治療當中。
 
4.對半抗原辨識能力佳
最後,目前研究發現脂類、多醣類和小分子化合物在體內主要由抗原呈遞細胞表面的CD1(Cluster of differentiation 1)家族分子呈現給T細胞,與MHC I和MHC II分子無關。 CD1家族分子主要包括CD1a、CD1b、CD1c、CD1d和CD1e五種分子,在兔子中這五種分子都有表達,而在老鼠及人類中僅僅只有CD1d表達。因此和小鼠及人體相比,兔子更容易產生針對小分子抗原的抗體。
 
兔單株抗體的實際應用
 
1.科學研究領域
兔單株抗體被廣泛應用於生命科學研究的各個領域,常見的應用主要為Western、IHC、Flow cytometry、ELISA等。
2.診斷與臨床檢驗
在腫瘤免疫和治療相關的檢測試劑中,兔單抗的高特異性和親和力,提高了檢驗人員對IHC病理結果的判讀,使兔單抗成為未來診斷抗體的理想選擇
3.疾病治療
兔單抗因為其高特異性,可減少治療過程中的脫靶效應(Off-target effect),目前臨床上常見的兔單抗藥物如: Brolucizumab, Eptinezumab等
4.其他檢測
兔子的免疫系統可以辨識小分子化合物的細微變化,對於抗原表位的敏感度較高,因此兔單抗在針對小分子化合物的檢測,如病毒檢測、環境汙染、食品安全等多方面有著廣泛的應用
 
針對這個部分,ABclonal聯合YUROGEN開發了全球領先的第四代兔單株抗體篩選技術平台(SMabTM),透過Single B Cell sorting技術,研發和生產多樣兔單抗產品,加速生命科學研究試劑與高端診斷原料的研發與生產。
 
SMabTM技術平台簡介
SMabTM重組單株抗體開發技術平台(Single Cell Based Monoclonal Antibody Discovery Platform),是以單顆B細胞建立單株抗體的開發平台。在動物免疫後,該技術透過B細胞分選的方式分離單顆細胞,採用YUROGEN專利細胞培養液在體外進行單顆B細胞培養,並分泌足夠的抗體IgG用於初步篩選,後續再進行二次篩選及抗體基因克隆,大幅增加抗體製備成功率及縮短抗體製備時間。具體開發流程如下:
 

圖示: SMabTM 抗體開發平台流程圖
 
SMabTM 技術平台透過辨識特定抗原的B細胞,大大提高分選出的B細胞抗體陽性率,辨識抗原的B細胞陽性率高達60%,為一般雜交瘤(Hybridoma cell)技術的5-10倍。並且此平台每批篩選出2000-10000個辨識抗原的B細胞進行培養適合高通量篩選,大幅增加初始抗體庫的多樣性。除此之外,與雜交瘤細胞技術不同,SMabTM 技術平台使用的專利細胞培養液不含有HAT選擇培養基成分,無細胞毒性,可以直接用於細胞功能性篩選,非常適合進行抗體開發。以下是不同兔單株抗體開發平台比較:
 

 
除了高品質兔單抗之外,ABclonal還具有專業團隊進行多項抗體驗證,除了常規的WB,IHC,IF,IP等實驗驗證,針對抗體一直存在的重複危機,不同批次的抗體品質及專一性具有巨大差異,ABclonal團隊利用全世界公認最嚴格的抗體驗證技術-基因敲除細胞株驗證法(KO/KD cell line Validation)檢測目錄抗體,透過CRISPR/Cas9建議驗證系統,提高抗體專一和穩定性。另一方面,ABclonal也推出病理驗證抗體,透過臨床真實樣本檢測,大幅增加抗體在臨床樣本使用成功率,為研究人員爭取到寶貴的時間以滿足不同的個人化需求。



2022年的秋天,拜爾國際公司(BioAb)推出全球首創獨一無二的「抗體訂閱方案」,本方案能大幅降低超過60%抗體成本,讓用戶的研究更大更快。ABclonal的抗體產品線擁有最高品質兔單抗與KO/KD驗證抗體,超過18,000篇國際期刊的引用,多達16,000種抗體任您選用,同時我們也幫您在台灣預先準備500多種抗體(持續增加中)三天內快速到貨讓您研究不需等待。全線上系統化訂購智能又快速,先端研究領域抗體(例如:外泌體研究、RNA修飾、細胞免疫療法、免疫抑制點…等)種類齊全。

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