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建立細胞材料重點步驟：選擇來源、建細胞庫、凍存、品管
圖爾思生物科技儀器部業務專員李明駿 (攝影/鐘御慈)
圖爾思生物科技儀器部業務專員李明駿，分享了在開發胞外體之初，如何建立起穩定的細胞材料。
李明駿表示，胞外體的用途和適應症，與其來源、培養方式等皆息息相關，例如不同組織來源間質幹細胞(MSC)所產生的胞外體，或是不同免疫細胞產生的胞外體等，都可對應到不同適應症。而細胞培養過程中，包括培養方式為2D或3D，或培養時的養分補充、繼代、收穫方式等，都會影響到胞外體。
李明駿表示，細胞來源的選擇、培養條件優化、建立穩定細胞庫並定期更新、嚴格的細胞培養操作、測試和品質控制等，是開發細胞材料的重點。
「因此，在開發胞外體的細胞材料時，需先找出合適的親代細胞和穩定的細胞培養環境，進而建立細胞庫、找到凍存參數、分層凍存、品質管控、符合法規要求，即能製造出符合所需的細胞。」李明駿說。
他也詳細說明了以上步驟的細節，例如選定細胞來源時，若選用同種異體的初代細胞，則需確認最終產品的EVs能否維持品質一致；源自誘導性多功能幹細胞(iPS)/胚胎幹細胞(ES)、株化細胞，就需進一步建立主細胞庫 (MCB) 及生產用細胞庫(WCB)，且需定期確認體外培養細胞年齡(LIVCA)。
圖爾思代理的Cytiva VIA Freeze免液態氮程序降溫儀可以提供符合GMP及21 CFR part11的穩定降溫平台；Beckman Coulter的Vi-CELL BLU細胞活性分析儀則可透過自動化的細胞計數，最大程度減少人為操作的誤差，以確保細胞凍管的一致性。
胞外體製備除了拚產率 更要注意批次再現性
工研院謝惠珠博士 (攝影/鐘御慈)
工研院謝惠珠博士表示，胞外體製劑開發充滿挑戰，從一開始細胞源的選擇、細胞前處理、細胞培養、胞外體純化到品質分析，每個環節都涉及到非常多而複雜的選項。不過在此之前，最重要的是先決定適應症與胞外體的用途，才能選擇最適合的製備與分析方法。
謝惠珠舉例，製備方法包括以未經改造的天然細胞分泌胞外體；以細胞激素、生長因子、化合物或超音波等刺激細胞，促使細胞分泌更大量的胞外體；透過基因改造細胞，製造帶有特定表面蛋白或帶有特定mRNA的胞外體；以及將胞外體額外添加生物分子或藥物等。謝惠珠也提醒，特殊的誘導與培養條件可能提高胞外體的產率和活性，不過也需注意是否產生副作用，以及是否能維持批次的再現性。
至於胞外體的純化技術也有很多種，謝惠珠表示，沒有所謂最完美的選擇，應依據自身對於純度、回收率、結構完整性、通量、GMP相容性等的需求來評估純化策略。工研院則自主開發出結合大小排除層析(SEC)和切向流過濾(TFF)的分離技術，可達到良好的回收率，製造高純度胞外體。
確保胞外體安全、有效 功能性/功效性試驗不可缺
圖爾思生命科學部產品副理蕭楹澄 (攝影/鐘御慈)
圖爾思生命科學部產品副理蕭楹澄，分享了多項胞外體開發時，為驗證其實際療效，可進行的功能性與功效性試驗。
蕭楹澄表示，近年胞外體的臨床開發越來越廣泛，擴及癌症，甚至骨科、異位性皮膚炎、乾眼症等新領域；而臨床開發時，後續的功能性測試，就是驗證胞外體能否用於目標適應症的重要過程。
在品質監控檢測項目上，圖爾思提供包括：表面蛋白表現檢測，也針對胞外體提供各項身份鑑定/純度分析，例如：蛋白質純度、粒徑、濃度等，此外也包括多種雜質分析、安定性測試、功能性分析(如：蛋白質、核酸、脂質等分析)。
蕭楹澄表示，圖爾思可提供一站式的整體分析服務，甚至後端的動物實驗也能協助。其在動物實驗方面，也已建立包括異位性皮膚炎、類風濕性關節炎、痛風、毛髮再生、非酒精性脂肪肝、褥瘡、肌少症等動物模型可供使用。
亞洲首台CytoFLEX nano demo unit 進駐圖爾思示範實驗室
今日研討會中，主辦單位也宣布，圖爾思在和美商貝克曼合作下，已將貝克曼旗下最新流式細胞儀——全亞洲首台CytoFLEX nano demo unit，進駐到圖爾思的示範實驗室(Demo Lab)。
美商貝克曼庫爾特台灣分公司生命科學部行銷經理蔡孟君，分享了貝克曼適合用於胞外體開發的最新流式細胞儀。
美商貝克曼庫爾特台灣分公司生命科學部行銷經理蔡孟君 (攝影/鐘御慈)
她表示，貝克曼是首家將敏銳、小體積的雪崩光電二極體(APD)偵測器放入流式細胞儀的公司，他們今年最新推出的機型CytoFLEX nano，最小可偵測到40奈米的粒子、同時染6個螢光，並且可看5個側向散射光(side scatter)，更將MIFlowCyt-EV guidelines 標準化放入機器中，幫助研發人員更明確偵測到胞外體狀態。
蔡孟君也特別強調，有5個側向散射光功能上，因能以雷射從更多不同角度照射構型各異的胞外體，可有效幫助找出特別構型的胞外體。
(報導/巫芝岳、劉馨香)
