建立細胞材料重點步驟:選擇來源、建細胞庫、凍存、品管
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圖爾思生物科技儀器部業務專員李明駿 (攝影/鐘御慈)
圖爾思生物科技儀器部業務專員李明駿,分享了在開發胞外體之初,如何建立起穩定的細胞材料。
李明駿表示,胞外體的用途和適應症,與其來源、培養方式等皆息息相關,例如不同組織來源間質幹細胞(MSC)所產生的胞外體,或是不同免疫細胞產生的胞外體等,都可對應到不同適應症。而細胞培養過程中,包括培養方式為2D或3D,或培養時的養分補充、繼代、收穫方式等,都會影響到胞外體。
李明駿表示,細胞來源的選擇、培養條件優化、建立穩定細胞庫並定期更新、嚴格的細胞培養操作、測試和品質控制等,是開發細胞材料的重點。
「因此,在開發胞外體的細胞材料時,需先找出合適的親代細胞和穩定的細胞培養環境,進而建立細胞庫、找到凍存參數、分層凍存、品質管控、符合法規要求,即能製造出符合所需的細胞。」李明駿說。
他也詳細說明了以上步驟的細節,例如選定細胞來源時,若選用同種異體的初代細胞,則需確認最終產品的EVs能否維持品質一致;源自誘導性多功能幹細胞(iPS)/胚胎幹細胞(ES)、株化細胞,就需進一步建立主細胞庫 (MCB) 及生產用細胞庫(WCB),且需定期確認體外培養細胞年齡(LIVCA)。
圖爾思代理的Cytiva VIA Freeze免液態氮程序降溫儀可以提供符合GMP及21 CFR part11的穩定降溫平台;Beckman Coulter的Vi-CELL BLU細胞活性分析儀則可透過自動化的細胞計數,最大程度減少人為操作的誤差,以確保細胞凍管的一致性。
胞外體製備除了拚產率 更要注意批次再現性
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工研院謝惠珠博士 (攝影/鐘御慈)
工研院謝惠珠博士表示,胞外體製劑開發充滿挑戰,從一開始細胞源的選擇、細胞前處理、細胞培養、胞外體純化到品質分析,每個環節都涉及到非常多而複雜的選項。不過在此之前,最重要的是先決定適應症與胞外體的用途,才能選擇最適合的製備與分析方法。
謝惠珠舉例,製備方法包括以未經改造的天然細胞分泌胞外體;以細胞激素、生長因子、化合物或超音波等刺激細胞,促使細胞分泌更大量的胞外體;透過基因改造細胞,製造帶有特定表面蛋白或帶有特定mRNA的胞外體;以及將胞外體額外添加生物分子或藥物等。謝惠珠也提醒,特殊的誘導與培養條件可能提高胞外體的產率和活性,不過也需注意是否產生副作用,以及是否能維持批次的再現性。
至於胞外體的純化技術也有很多種,謝惠珠表示,沒有所謂最完美的選擇,應依據自身對於純度、回收率、結構完整性、通量、GMP相容性等的需求來評估純化策略。工研院則自主開發出結合大小排除層析(SEC)和切向流過濾(TFF)的分離技術,可達到良好的回收率,製造高純度胞外體。
確保胞外體安全、有效 功能性/功效性試驗不可缺
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圖爾思生命科學部產品副理蕭楹澄 (攝影/鐘御慈)
圖爾思生命科學部產品副理蕭楹澄,分享了多項胞外體開發時,為驗證其實際療效,可進行的功能性與功效性試驗。
蕭楹澄表示,近年胞外體的臨床開發越來越廣泛,擴及癌症,甚至骨科、異位性皮膚炎、乾眼症等新領域;而臨床開發時,後續的功能性測試,就是驗證胞外體能否用於目標適應症的重要過程。
在品質監控檢測項目上,圖爾思提供包括:表面蛋白表現檢測,也針對胞外體提供各項身份鑑定/純度分析,例如:蛋白質純度、粒徑、濃度等,此外也包括多種雜質分析、安定性測試、功能性分析(如:蛋白質、核酸、脂質等分析)。
蕭楹澄表示,圖爾思可提供一站式的整體分析服務,甚至後端的動物實驗也能協助。其在動物實驗方面,也已建立包括異位性皮膚炎、類風濕性關節炎、痛風、毛髮再生、非酒精性脂肪肝、褥瘡、肌少症等動物模型可供使用。
亞洲首台CytoFLEX nano demo unit 進駐圖爾思示範實驗室
今日研討會中,主辦單位也宣布,圖爾思在和美商貝克曼合作下,已將貝克曼旗下最新流式細胞儀——全亞洲首台CytoFLEX nano demo unit,進駐到圖爾思的示範實驗室(Demo Lab)。
美商貝克曼庫爾特台灣分公司生命科學部行銷經理蔡孟君,分享了貝克曼適合用於胞外體開發的最新流式細胞儀。
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美商貝克曼庫爾特台灣分公司生命科學部行銷經理蔡孟君 (攝影/鐘御慈)
她表示,貝克曼是首家將敏銳、小體積的雪崩光電二極體(APD)偵測器放入流式細胞儀的公司,他們今年最新推出的機型CytoFLEX nano,最小可偵測到40奈米的粒子、同時染6個螢光,並且可看5個側向散射光(side scatter),更將MIFlowCyt-EV guidelines 標準化放入機器中,幫助研發人員更明確偵測到胞外體狀態。
蔡孟君也特別強調,有5個側向散射光功能上,因能以雷射從更多不同角度照射構型各異的胞外體,可有效幫助找出特別構型的胞外體。
(報導/巫芝岳、劉馨香)