《Nature》子刊:麻省總醫院創新CRISPR酵素 突破基因切割限制性

撰文記者 巫芝岳
日期2022-10-12
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(圖片來源:網路)

近(6)日,美國麻省總醫院(Massachusetts General Hospital)的研究團隊,開發出一項新的CRISPR基因編輯方法,運用CRISPR-Cas9酵素的變體「SpRY」,能突破以往使用Cas酵素系統的限制,讓DNA的切割不再受到「需位於兩段特定序列間」的限制。該研究發表於期刊《Nature Biotechnology》。

目前的CRISPR-Cas基因編輯方法,雖然能用於切割幾乎所有的DNA序列,但仍具有「需先識別出位於標靶DNA兩側特定短序列」的限制,而麻省總醫院團隊開發出的SpRY變體,則可突破這項限制。

CRISPR-Cas酵素需辨認出的特定序列,被稱為「PAM」(protospacer adjacent motif);進行基因切割時,Cas蛋白會與一段引導RNA (gRNA)形成複合體,再和與之互補的DNA進行辨識,此時主要透過gRNA前端約20個鹼基長度的序列來辨識,該序列稱為protospacer,緊接在這段序列後的三個核苷酸則稱為PAM。

由麻省總醫院研究員Benjamin P. Kleinstiver領導的該團隊,經由變異型的酵素系統SpRY,則能在無需PAM的狀況下進行特定基因的切割,該過程又稱為「SpRY DNA digests」(SpRYgests)。

研究團隊也在實驗室中針對130多個DNA序列,並以SpRY和相對應的gRNA複合物切割成功,且包括以前使用限制性內切酶或其他CRISPR-Cas蛋白(Cas9、Cas12),都無法切割的DNA序列,其也能成功切割。

此外,該團隊也提出了一套「一鍋式」(one-pot,係指在一個反應系統中連續進行多個反應)的gRNA合成方法,讓SpRYgests的應用更為精簡。

研究團隊表示,這項新工具有望加速各種基礎研究,並降低研究成本,且包含各種未來可能產生臨床意義的研究;未來,SpRY有機會廣泛應用在簡化現有的基因改造方法、發展更複雜的改造方法,以及協助建構次世代的定序資料庫等。

參考資料:

1. 論文原文:https://www.nature.com/articles/s41587-022-01492-y

2. https://www.sciencedaily.com/releases/2022/10/221011161219.htm

(編譯/巫芝岳)