近(18)日，瑞士蘇黎世大學(University of Zurich)的科學家開發出一項創新的「雙腺相關病毒(AAV)載體」，加上其基於mRNA的反剪接技術，可用於基因治療時的大片段基因表現。這項稱為REVeRT的技術，能應用於多種基因位點的編輯，包括表觀遺傳學基因編輯、CRISPR活化劑(CRISPRa)等，突破過去以雙載體攜帶大片段基因時，重組效率不佳或毒性高的問題。該研究發表於期刊《Nature Communications》。

由蘇黎世大學教授Elvir Becirovic領導的團隊，開發出這項基於mRNA層面的雙AAV載體技術，並在實驗中證明，該技術能成功遞送包括CRISPRa、先導編輯(prime editing)的編輯器片段，並於體內使這些基因編輯工具重組、活化。

他們也證明REVeRT可在包含：視網膜、心臟、肺、肝臟、骨骼肌和大腦等組織和器官中，重建CRISPRa模組之一的Cas9-VPR酵素，未來可望幫助需遞送至這些器官的CRISPR療法開發。

在基因編輯領域中，目前若要將大片段基因(如：CRISPRa等執行CRISPR基因編輯的模組)有效遞送到生物體內，會透過「雙AAV載體」方式進行，即將目標基因切分為二、分別包裝到獨立AAV載體中，當兩載體遞送到目標組織後，再從AAV基因體、mRNA或蛋白質層面上進行重新組裝。

而目前多數方法是在AAV基因體的層次上重組，即以「DNA反剪接」的方式進行，然而此方法重建效率較差；在蛋白質層面上，也有人使用分裂內含子(split intein)方式，讓氨基酸內帶有能自行剪接的序列進行，該方法雖重建效率高，但可能引起生物體免疫反應或甚至致病，因此安全性堪憂。

本次蘇黎世團隊的成果，則是透過目前開發仍少的mRNA反式剪接進行，該方式與AAV遞送結合上，至今仍只在細胞培養實驗中成功表現，且其安全性和有效性未徹底證實，因此本次研究可說是首次證實該方法能成功用於活體中。

研究團隊最終在小鼠實驗中證實，REVeRT技術所開發的載體，透過玻璃體內注射與此後定期的基因補充，能成功治療患有罕見眼科疾病斯特格氏症(STGD)的小鼠模型。

此外，這項方法即使以腹腔內途徑給藥，也能在許多組織或器官中作用，因此可能讓某些疾病的治療變得更容易，例如局部給藥時無作用，或需要同時進行多個器官治療時。

不過，REVeRT目前僅在小動物實驗中得以證實，仍須在非人類靈長類動物中近一步取得安全性數據，才得以進入臨床試驗。

參考資料：

1. 論文原文：https://www.nature.com/articles/s41467-023-42386-0

2. https://www.genengnews.com/topics/genome-editing/dual-aav-method-delivers-dna-thats-reassembled-into-large-genes/

(編譯/巫芝岳)